Приготовление разведений

Численность популяции микроорганизмов обычно велика, поэтому для получения изолированных колоний готовили ряд последовательных разведений. Разведения готовили в стерильной водопроводной воде. В ходе опыта использовали один и тот же коэффициент разведения, 10, это уменьшает вероятность ошибки.

Для приготовления разведений стерильную водопроводную воду разливали по 9 см3 в стерильные пенициллиновые флаконы (пенициллинки). Затем 1 см3 исследуемой суспензии стерильным одноразовым шприцем объемом 1 мл переносили во флакон с 9 см3 стерильной воды – это первое разведение (10-1). Полученное разведение тщательно перемешивали, несколько раз вбирая в шприц и выпуская из него полученную суспензию клеток. Затем тем же шприцем отбирали 1 мл суспензии и переносили во вторую пробирку, получая второе разведение (10-2). Таким же образом готовили последующие разведения. Степень разведения зависит от плотности исследуемой популяции микроорганизмов; соответственно она тем больше, чем больше плотность популяции.

Для приготовления каждого разведения следует обязательно использовать новый шприц. Пренебрежение этим правилом приводит к получению ошибочного результата вследствие высокой способности клеток микроорганизмов к сорбции на поверхности многих материалов.

Посев

Высевать суспензию можно поверхностным или глубинным способом. Перед посевом поверхностным способом (рисунок 1) разлили расплавленную агаризованную питательную среду в ряд стерильных чашек Петри от 15 до 20 см3 в каждую. Чашки оставили на горизонтальной поверхности, пока среда не застынет. Поверхности агаризованных сред перед посевом подсушили для удаления конденсационной воды, поместив чашки в термостат на 2-3 суток крышками вниз.

Рисунок 1 –Схема приготовления разведений и посева суспензии
микроорганизмов

В чашку Петри с подсушенной средой внесли точно измеренный объем (0,1 см3) соответствующего разведения и распределили его стеклянным шпателем по поверхности среды. Высевы на плотную среду проводили из трех последних разведений, причем из каждого делали по два параллельных высева. Для каждого разведения использовали стерильный шпатель. После посева чашки Петри поместили в термостат крышками вниз.


4225908134368793.html
4225922652691031.html
    PR.RU™